免疫荧光应用|巨噬细胞在ibidi腔室载玻片通道载玻片中的培养处理

　　小鼠巨噬细胞系RAW-264.7（生物安全等级2）在ibidi µ-Slides VI 0.4 和8孔腔室载玻片的培养方案。这是一个特殊的细胞系的例子，用于显示粘附时间，细胞密度和细胞形态的示范。本应用可根据您的具体实验要求进行调整。

　　1.细胞培养与材料制备　　

　　在将细胞接种到玻片中之前，按照常规的方法培养细胞。　　

　　µ-Slide VI 0.4 ：通道玻片和培养基，在37℃和5%CO2培养箱中培养过夜。这对于避免随着时间的推移出现气泡至关重要。为此，在50 ml器中填充适量的培养基，并轻轻地将瓶盖拧紧。在 µ-Slide 8孔载玻片开放孔井中，气泡可排出到大气中。　　

　　拆开µ-Slide的包装，把它放在µ-Slide支架上，并在准备细胞悬浮液时同时将盖子放在 Luer 适配器/孔上。

　　2.播种细胞

　　分离细胞：　　

　　吸出培养瓶中的培养基，并用PBS洗涤细胞一次。每75cm² 烧瓶中加入3-5 ml的Accutase，并将烧瓶放入培养箱中以加快分离速度。如果是RAW-264.7细胞系，则大约需要8分钟。使用Accutase分离的细胞存活率更高。　　

　　2.1. 将细胞接种到µ-Slide VI 0.4中　　

　　在µ-Slide VI 0.4建议的细胞浓度：最终细胞数  0.3 x 10 5 cells/cm²，制备浓度6 x 10 5cells/ml。通过将移液器底部直接放在通道的入口上，将30 µl细胞悬浮液填充到每个通道中。将盖子盖在玻片上，在37°C和5％CO2下孵育半小时以固定细胞。　

　　细胞贴壁后，分别用60 µl无细胞培养基填充储液池。 避免将移液器吸头直接指向通道的入口。将玻片放回培养箱中。　　

　　图1：接种后一小时，在ibiTreat µ-Slide VI 0.4（货号80606）中的RAW-264.7　　

　　图2: 在ibiTreat µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7，孵育24小时后　　

　　图3:在ibiTreat µ-Slide VI0.4中的RAW-264.7，培养四天后

　　2.2 将细胞播种在µ-Slide 8 well 中　　

　　在µ-Slide 8 well建议的细胞浓度：最终细胞数 0.3 x 10 5 cells/cm² ，制备浓度 1.1 x 10 5 cells/ml。将300 µl 的细胞悬浮液注入各孔中。将盖子盖在玻片上，在37°C和5% CO2中孵育。不需要进一步添加培养基。

　　图4：在ibiTreat µ-Slide 8 well(货号：80826)中的RAW-264.7，播种后1小时　　

　　图5: 在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7，孵育24小时后

　　图6：在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7，经过四天的培养

　　为获得最佳的分布的匀的细胞，我们建议使用像µ-Slide VI 0.4 这样的通道载玻片。在8孔腔室载玻片中，细胞密度可能会在孔的整个表面上因点而异，具体取决于细胞播种过程中的处理。

　　3. 免疫荧光染色　　

　　像往常一样为您的细胞固定和染色。　　

　　注意：在 µ-Slides 中染色时注意液体的处理　　

　　µ-Slide VI 0.4 ：更换液体，先吸出两个储液池而不排空通道。 如果您使用的是真空设备，请注意不要将吸头直接放在通道的入口上。 用100 µl新溶液冲洗通道3次。 从一侧添加新的溶液，通过通道流入另一个储液池，然后从另一侧吸出，直到两个储液池都排空。注意通道永远不要干涸！　　

　　µ-Slide 8孔载玻片：在 µ-Slide 8孔中，无需特殊处理措施。像在任何其他培养皿或孔板中一样的交换液体。