ibidi24孔预置插件培养板|高通量细胞迁移实验解决方案

　　此次实验便是应用了ibidi Culture-Insert 2 Well 在24孔培养板上分析MCF-7细胞迁移实验的详细方案，为伤口愈合实验提供了完整的解决方案，并进行测试了五种不同浓度的人表皮生长因子（hEGF）对迁移行为的影响并与对照条件进行比较。

　　实验工作流程：

　　3.1 步骤1：细胞接种　　

　　正确的接种浓度是一个关键参数，因为24小时后应达到汇合的单层。需要进行预实验以确定所用细胞系的最佳浓度。

　　1. 取下附在μ-Plate底部的保护膜。　

　　2. 像往常一样准备细胞悬液。建议包括离心步骤以去除死细胞和细胞碎片。将MCF-7细胞悬浮液调节至细胞浓度为5×105细胞/ml。　　

　　3. 将70μl细胞悬浮液应用于2孔的培养插件每个孔中。避免摇动μ-Plate，因为这会导致细胞分布不均匀。　　

　　4. 将细胞在37°C和5％CO2培养至少24小时。　　

　　图2在开始细胞接种步骤（A）之前取下保护膜。将70μl细胞悬浮液填充到2孔培养插件（B）的每个孔中。

　　3.1 步骤2：划痕形成

　　μ-Plate 24 Well的使用并行测试五种不同的hEGF浓度和对照条件。每种实验条件可以进行四次技术重复.　

　　1. 在显微镜下观察培养24小时后的细胞密度。如果24小时后未达到融合细胞单层，则将μ-Plate于细胞培养箱中再培养几个小时。定期检查汇合点。　　

　　2. 将生长因子添加到细胞培养基中以获得以下浓度：0,5,10,20,30和40ng / ml EGF。　　

　　3. 用无菌镊子轻轻取出2孔培养插件。要移除培养插件，请抓住一个角，如图3所示。　　

　　4. 用无细胞培养基或PBS洗涤细胞层以除去细胞碎片和未附着的细胞。　　

　　5. 小心吸出无细胞培养基或PBS。　

　　6.用移液管将1ml细胞培养基加到24孔板的每个孔中。

　　图3使用无菌镊子取出2孔培养插件

　　3.1 步骤3：获取显微镜图像　　

　　我们建议录制延时视频，以确定时间依赖性和细胞迁移的特征。　　

　　1. 将μ-Plate 24孔培养板放在显微镜上并确定所有24个孔的位置。　　

　　2. 在接下来的几个小时内多次拍摄图像，开始观察过程。在24小时内每30分钟拍摄一次图像。　　

　　4.结果　

　　分析显微图像以获得关于培养细胞迁移特征信息。分析细胞覆盖区域随时间的变化来确定细胞速度。

　　图4 hEGF对MCF-7细胞迁移行为影响的比较。测试了四种不同的EGF浓度，并与对照实验进行了比较。

　　使用Culture-Insert 2 Well 在24孔培养板上进行测试六种不同（或更多）的条件。通过比较细胞速度与对照条件的速度来分析五种不同hEGF浓度（每种重复四次）的影响。实验数据显示，与对照组相比，hEGF增加了MCF-7细胞的细胞速度。如图4所示，hEGF> 10ng / ml的浓度显示细胞速度没有进一步增加。