ibidi与你共探显微镜奥秘，知识与技巧带你冲破液面难题！

　　想改善您的显微镜图像吗？您对自己的图像总是这样感到不满吗？别担心，在这里ibidi雷萌将帮助您获得精美的图像！在这里，雷萌将向您展示弯液面的形成是如何干扰相位对比显微镜成像的。如何能获得清晰且对比度良好的图像？

相差成像　

　　到目前为止，相衬是生物光学显微镜中较常用的方法。它是细胞培养和活细胞成像中成熟的显微技术。当使用这种廉价的技术时，无需预先固定或标记，就可以在自然状态下观察活细胞。　　

　　未染色的活细胞几乎不吸收光。光吸收不良导致图像中强度分布的差异极小。这使得细胞在明场显微镜下几乎不可见或根本不可见。当光穿过细胞时，会发生小的相移，这是人眼看不到的。在相差显微镜中，这些相移被转换成振幅的变化，可以观察到图像对比度的差异。然而，这种无标记技术在很大程度上取决于光路中组件的正确对齐。这种对准可能会受到自然发生的弯液面效应的干扰，从而导致相衬变弱。　　

　　相差显微镜要考虑的一个重要问题是弯液面，它是在气液界面自然形成的。这种现象会显着降低图像质量，尤其是在像标准96孔板这样的小型培养孔中。由于弯液面而产生的衍射扰乱了光路内相位环和相位板的正确对准。　　　　

　　左边具有弯液面的光束路径未对准，右边是无弯液面的光路对准正确，相位对比良好。　　

　　如何避免弯液面？　　　

　　ibidi开发出了多种解决方案完-美-地解决了这个问题——并保证出色的相位对比图像：　　

　　* ibidi μ-Slide 15孔3D载玻片和μ-Plate 96孔3D载玻片　　

　　* ibidi channel μ-Slides通道载玻片　　

　　* ibidi μ-Slides PH+　

　　* ibidi μ-Dish 35 mm Quad四区块 高壁培养皿　　

　　μ-Slide 15孔3D载玻片 (formerly μ-Slide Angiogenesis)和μ-Plate 96孔3D载玻片 (formerly μ-Plate Angiogenesis 96 Well)　　　　

　　ibidi μ -Slide 15 Well 3D 和μ-Plate 96 Well 3D （下图右）提供理想的细胞培养容器：　

　　1）可获得出色的相差图像；　　

　　2）一种-独-特-的几何技巧，即“孔中孔"技术，抑制了弯液面的形成，并在整个观察区域产生了良好的相位对比。　　

　　而普通的细胞培养容器（下图左）：　　

　　1）气液界面弯液面：大部分观察区域相差较差。　　

　　2）凝胶表面的弯液面：不可能同时聚焦所有细胞。　　

　　ibidi channel μ-Slides通道载玻片　　

　　ibidi channel μ-Slides通道载玻片为相差显微镜提供了理想的光学条件。培养细胞时，通道自下而上充满培养基。这在几何上抑制了弯液面的形成，并在整个通道中实现了出色的相差。　　　　

　　ibidi μ-Slides PH+　　

　　ibidi μ-Slides PH+（有2 Well Ph+、4 Well Ph+两种规格）专为相差显微镜设计。每个孔中的特殊中间挡板可避免弯液面形成并保证出色的相差——无论孔的那个部分都能完-美-成像。　　　

　　使用μ-Slide 2 Well Ph+、4 Well Ph+可减少弯液面，增加对比度良好的细胞面积。这种良好的对比是由于中间挡板产生的平行光束路径。　　

　　Ph+孔与标准孔的比较：Ph+孔无弯液面效应　　　　

　　ibidi μ-Dish 35 mm Quad四区块 高壁培养皿　　

　　中心挡板提供-卓-越-的相位对比度　　　

　　ibidi μ-Dish 35mm Quad四区块高壁培养皿（左图）居中的中间挡板减少了弯液面的形成，从而实现了出色的相位对比光学。同时，这种Ph+特征有利于细胞的均匀分布。　　

　　就像ibidi μ-Slide 2 Well Ph+和μ-Slider 4 Well Ph+一样，μ-Dish 35mm Quad四区块高壁培养皿将出色的细胞生长和出色的高分辨率显微镜结合在一起，无论是使用相差显微镜还是荧光显微镜。　　

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