实验目的:通过对裸鼠肿瘤组织样品的前处理研磨破碎,提取样品中的蛋白;再验证通过外泌体干预的荷瘤鼠模型中,肿瘤的基因表达情况是否与蛋白测序结果一致。
实验设备:冷冻组织研磨仪 JXFSTPRP-CLN-48
裸鼠肿瘤组织样品的前处理研磨实验操作过程:
1.将小鼠通过注射麻醉剂慢慢失去知觉后,对小鼠进行解剖取小鼠身上的肿瘤块。
2.取下肿瘤块后在将肿瘤块剪切成绿豆大小的块状,可先放入液氮或者-80℃的冰箱中方便后期研磨。
3.冷冻研磨仪开机,先将仪器制冷功能打开,温度设置成-20℃,保证样品在研磨时蛋白不会发生裂解。
4.研磨仪预设温度达到后,将刚刚取好剪切后的样品放入研磨管中,每个研磨管尽量放100mg左右,再往研磨管中加入4颗研磨珠,再加入蛋白提取液盖上研磨管盖,进行湿磨。将研磨管放入适配器中,适配器再固定到研磨仪上。
5.设置研磨仪参数,设置好研磨频率和时间,研磨次数2次,研磨中断时间15s,经过研磨后,再进行蛋白的提取。
实验前处理研磨操作注意事项:
1、研磨管放到适配器上,一定要注意研磨管的平面配平,否则会损坏研磨仪的宝塔。
2、适配器在放到研磨仪宝塔上时,固定螺母一定要固定紧,否则既会损坏研磨仪宝塔,还会对适配器底部造成损坏。
裸鼠肿瘤组织样品的前处理研磨实验前后效果图:
实验结果:裸鼠肿瘤组织样品在经过冷冻组织研磨仪仪的前处理研磨实验应用后,其对裸鼠肿瘤组织样品提取的蛋白含量充足;且低温冷冻的实验环境也为蛋白质活性的保留、核酸降解的抑制得到的有效解决。
冷冻组织研磨仪能在非常短的时间内将土壤、植物和动物的组织,器官等样品完成研磨、粉碎。随着近代医学的发展,特别是肿瘤学和免疫学的需要,动物组织的研磨已经成为了实验室不可少的一个环节。JXFSTPRP-CLN-48低温研磨样品,实现无交叉污染的同时,低温研磨样品能够有效抑制核酸降解、保留蛋白质活性。是实验室样品前处理的好帮手。